摘要:

    目的:研究环境温度的变化和样本固定的方法对于激光共聚焦显微镜检测样品的影响.方法:选取1个铃兰样片,对在冷冻保存和常温下的样片进行荧光强度检测.将样片保存于冰箱-20℃冷冻12 h,取出恢复至室温后利用激光共聚焦显微镜观测样片荧光强度变化;采集室温下铃兰样片图,观测样片荧光强度;样片观测时间间隔5 min,相同视野下采集图像,共采集30 min.依据处理方法的不同将其分为A组和B组,A组为甲醇处理组(3个皿);B组为甲醛处理组(3个皿),分别采用4％多聚甲醛缓冲液、预冷的甲醇两种固定剂,固定人正常肺上皮细胞,同时两组各再加渗透试剂TritonX-100处理细胞,用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)复染液对肺上皮细胞核染色;在相同显微镜的物镜和样品荧光激发强度及图像采集参数条件下,使用激光共聚焦显微镜观测、采集图像.结果:在冰箱-20℃冷冻保存的样片的荧光强度呈逐步上升趋势,室温下样片的荧光强度无明显改变.两组固定剂再加渗透试剂TritonX-100处理,细胞核染色效果更好.结论:环境温度的变化会影响样本荧光强度,普通固定剂固定细胞之后再加渗透试剂处理有利于细胞核染色.